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技術(shù)文獻(xiàn)

小鼠IgG1/2a/2b亞類(lèi)單抗腹水純化試劑盒
閱讀次數(shù)：50 發(fā)布時(shí)間：2025/12/12 16:17:11

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試劑原理：
本品利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀?xiàng)l件不同，通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)分析驗(yàn)證而得到的一個(gè)與傳統(tǒng)沉淀純化相比有較大不同的精細(xì)的具有高活性、高產(chǎn)率、快速以及良好重復(fù)性的單克隆抗體的純化方法。

試劑特點(diǎn)：
特點(diǎn)在于純化操作的簡(jiǎn)單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實(shí)驗(yàn)表明，本試劑盒可以得到90%左右純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過(guò)程中幾乎沒(méi)有損傷，完全保持應(yīng)有的活性；重復(fù)性和實(shí)際應(yīng)用極好。

適用范圍：
本試劑盒適用于小鼠IgG類(lèi)包含IgG1\IgG2a\IgG2b亞類(lèi)的單克隆抗體腹水的純化，不能用于IgG3、IgM和IgA類(lèi)單克隆抗體腹水的純化實(shí)驗(yàn)，如需要可選擇本公司其它貨號(hào)的純化試劑，它能為您帶來(lái)良好的結(jié)果。

試劑組成：
純化液A
純化液B
純化液C
純化液D
純化液E
透析試劑（粘稠或固體）
透析袋
說(shuō)明書(shū)

純化步驟：
1、從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復(fù)溫度30分鐘，期間可將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫復(fù)溫15分鐘，隨后用自來(lái)水邊沖邊搖勻快速解凍。
2、將化開(kāi)的單克隆抗體腹水8000-12000RPM， 4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘。
3、離心完畢上面若有浮沫和油脂先吸棄，然后將上清轉(zhuǎn)出到另一個(gè)干凈容器或離心管；按每1mL單克隆抗體腹水加入純化液A（加前確定沒(méi)有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1mL（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻30分鐘。
4、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積，再按此體積每1mL加入純化液C （加前確定沒(méi)有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）1mL（（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻10分鐘。
5、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1mL上清液加純化液D（加前確定沒(méi)有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1mL（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻20分鐘。
6、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/3。透析袋用純水浸泡3-5分鐘，然后用手揉捏數(shù)次，接純水沖洗干凈，抗體放入扎好。透析液是用純水溶解透析試劑到8L（也可先全部溶解到800mL，使用時(shí)10X稀釋?zhuān)�，透析依照抗體體積：透析液體積=1:100以上，4℃透析過(guò)夜。收集透析后抗體。
7、以透析后抗體體積：純化液E的體積=9：1的比例加入純化液E搖勻（也就是9體積抗體加1體積純化液E），靜置5min。8000RPM,4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘，棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。
8、將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊�？贵w體積：透析液體積=1:50以上；4℃透析，中間換液三次，透析總時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)。然后8000RPM, 4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘，收集上清測(cè)蛋白濃度后（可添加合適的防腐劑）-20℃存放備用。

特別提示：如果您在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到任何困難，請(qǐng)聯(lián)系我們獲取支持。