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    分光光度計的原理就是根據朗伯-比爾定律，我們簡單點來說，就是不同濃度的樣品有不同的吸光度，吸光度和樣品濃度成函數關系，根據這種關系，我們就能夠測出未知量的濃度。

    分光光度計根據波長不同主要是分為三種:紫外分光光度計、可見分光光度計、和近紅外分光光度計。我們今天主要說紫外可見分光光度計。

    A段（190-340）nm、B段（340-900）nm、C段（900-2600）nm由下圖可知，分光光度計可分為四個等級，我們常用的一般都是Ⅲ或Ⅳ級。

    紫外區(qū)主要是氘燈，氘燈提供的光源在(180～375)nm，關于氘燈的壽命大概在1000小時左右，可見區(qū)主要是用的鎢燈，鎢燈提供的光源在(320～2500)nm，鎢燈就是我們小時候用的電燈泡，壽命的話比氘燈要長點，具體儀器得具體分析了（1000-2000）h左右。

    大家需要注意的是不同的光區(qū)，使用不同的吸收池，紫外區(qū)用的是石英吸收池，可見區(qū)用的是玻璃吸收池。不容易被磨損的，就是石英吸收池。還有一種比較容易的辦法，就是石英吸收池和玻璃吸收池，在紫外區(qū)有不同的吸光度，在250nm波長時，如果吸光度＜0.07Abs的就是石英吸收池。

    吸光度的范圍：由于分光光度計原理是根據朗伯-比爾定律，我們做樣品時，盡可能的將吸光度控制在1以內，具體原因有興趣的可以去計算。

    A=lg(1/T)=Kbc

    A為吸光度,T為透射比(透光度),是出射光強度（I）比入射光強度(I0).

    K為摩爾吸光系數.它與吸收物質的性質及入射光的波長λ有關.

    c為吸光物質的濃度,單位為mol/L，b為吸收層厚度，單位為cm

    關于分光光度計預熱時間，一般要求在20min左右。這個也很好理解，就是小時候那種家用燈泡，剛開啟時沒有那么亮，等段時間后會慢慢變亮。穩(wěn)定后，我們做樣品才能穩(wěn)定可靠。

    透射比和吸光度的換算：分光光度計上就這兩個測量量，透射比和吸光度什么關系呢？吸光度=-log(透射比)。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司