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技術(shù)文獻(xiàn)

做實(shí)驗(yàn)選擇原代細(xì)胞還是細(xì)胞株?
閱讀次數(shù):1785 發(fā)布時(shí)間:2021/11/12 11:28:00
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各種已被命名和經(jīng)過(guò)細(xì)胞生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系或細(xì)胞株,都是一些形態(tài)比較均一、生長(zhǎng)增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細(xì)胞群。因此凡符合上述情況的細(xì)胞群也可給以相應(yīng)的名稱,即文獻(xiàn)中常稱之為已鑒定的細(xì)胞(Certified Cells)。已鑒定的細(xì)胞可用于各種實(shí)驗(yàn)研究和生產(chǎn)生物制品,當(dāng)上已建的各種細(xì)胞系(株)已難勝數(shù)。



體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名

體外培養(yǎng)細(xì)胞的名稱,隨培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展和細(xì)胞種類的增多而演變。早采用的名稱為細(xì)胞株(Cell strain),以后又出現(xiàn)細(xì)胞系(Cell Line)一詞,兩者曾一度混用致概念不明確,導(dǎo)致文獻(xiàn)中也很混亂。

名詞的由來(lái)

細(xì)胞株(cell strain)初為W.Earle(1940)所采用,他把自己建立的小鼠結(jié)締組織L系稱為“株”,1951年,George Gey把其建立的人體宮頸癌細(xì)胞Hela系稱為“株”。1954年,White另外使用了“系”來(lái)稱呼A Carrel培養(yǎng)的雞胚心臟的細(xì)胞群,細(xì)胞系(cell line)由此產(chǎn)生,之后這兩個(gè)名詞長(zhǎng)-期混用。

即使在1979年組織培養(yǎng)協(xié)會(huì)業(yè)術(shù)語(yǔ)委員會(huì)頒布“業(yè)名詞建議”和1984年在寧波召開(kāi)的全國(guó)動(dòng)物組織和細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)議通過(guò)“動(dòng)物細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)技術(shù)中的一些術(shù)語(yǔ)的譯名和解釋”之后,到目為止國(guó)內(nèi)對(duì)這兩個(gè)名詞的使用仍是混亂的,不僅在商品名中混用,在業(yè)文獻(xiàn)中亦有混用現(xiàn)象。

現(xiàn)將細(xì)胞系和細(xì)胞株區(qū)分如下:

1、細(xì)胞系(Cell Line):原代培養(yǎng)物經(jīng)-次傳代成功即成細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系(Lineage of Cells)所組成。

2、細(xì)胞株(Cell Strain):通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細(xì)胞株(finitecell strain);如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細(xì)胞株(continuous cell strain)。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

因此,細(xì)胞系泛指可傳代的細(xì)胞,細(xì)胞株是具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系。

(一)初代培養(yǎng)

初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng),即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第1次的培養(yǎng)物。一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)(Subculture)的細(xì)胞,便不再稱為初代培養(yǎng),而改稱為細(xì)胞系。

(二)細(xì)胞系

初代培養(yǎng)物開(kāi)始第1次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞,即稱之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限,則稱之為有限細(xì)胞系(Finite Cell Line);已獲無(wú)限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系,稱連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系(Infinite Cell Line)。

無(wú)限細(xì)胞系大多已發(fā)生異倍化,具異倍體核型,有的可能已成為惡性細(xì)胞,因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。無(wú)限細(xì)胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接觸抑制和無(wú)異體接種致癌性;有的不僅有永生性,異體接種也有致瘤性,說(shuō)明已惡性化。

這兩種不同性質(zhì)的無(wú)限細(xì)胞系,在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中對(duì)這些名詞的應(yīng)用上也常不十分嚴(yán)格。為概念上的明確,對(duì)有惡性的無(wú)限細(xì)胞系采用“惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系”一詞表示可能更妥。而對(duì)那些只具永生性而無(wú)惡性的細(xì)胞系,則用無(wú)限細(xì)胞系或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系即可。如 NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細(xì)胞系。

由某一細(xì)胞系分離出來(lái)的、在性狀上與原細(xì)胞系不同的細(xì)胞系,稱該細(xì)胞系的亞系(Subline)。

(三)克隆細(xì)胞株

從一個(gè)經(jīng)過(guò)生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群,稱細(xì)胞株。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群,亦可稱之為亞株(Substrain)

(四)二倍體細(xì)胞

細(xì)胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或基本相同(2n細(xì)胞占75%或80%以上)的細(xì)胞群,稱二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同,而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期,故屬有限細(xì)胞系。但隨供體年齡和組織細(xì)胞的不同,二倍體細(xì)胞的壽命長(zhǎng)短各異。

人胚肺成纖維細(xì)胞可傳50代土10代,人胚腎只有8~10代,人胚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞15~30代;如從老齡個(gè)體取可傳50則細(xì)胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細(xì)胞系可供研究衰老之用。

為保持二倍體細(xì)胞能長(zhǎng)-期被利用,一般在初代或2~5代即大量?jī)龃孀鳛樵N(Stook Cells),用時(shí)再進(jìn)行繁殖,用后再繼續(xù)凍存,可供長(zhǎng)-期使用或延緩細(xì)胞的衰老。

做實(shí)驗(yàn)選擇原代細(xì)胞還是細(xì)胞株?

原代細(xì)胞:從體內(nèi)直接分離的細(xì)胞。功能、代謝、形態(tài)類似體內(nèi)細(xì)胞的特點(diǎn),因此原代細(xì)胞適用于分析單個(gè)細(xì)胞形態(tài)、代謝、功能。原代細(xì)胞的缺點(diǎn)是:細(xì)胞均一性差,因?yàn)閺奶囟ńM織取下來(lái)的原代細(xì)胞可能處于不同的發(fā)育時(shí)期。增殖能力差、培養(yǎng)時(shí)間受限、轉(zhuǎn)染效率低。

細(xì)胞株:原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)長(zhǎng)-期培養(yǎng)和篩選后,功能、代謝、形態(tài)趨于均一化的無(wú)限增殖細(xì)胞。適用于整體水平實(shí)驗(yàn)。優(yōu)點(diǎn)是:容易培養(yǎng)、好感染、干擾因素少、便于同步化、實(shí)驗(yàn)好操作。缺點(diǎn)是:與整體差別大、可能喪失原代細(xì)胞的特性,細(xì)胞株在長(zhǎng)-期傳代過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生變異。所以同一個(gè)學(xué)名的細(xì)胞株,有可能有完-全不同的形態(tài)、代謝、功能表現(xiàn)。不同代數(shù)的細(xì)胞株,性質(zhì)也可能完-全不同。

原代細(xì)胞由于轉(zhuǎn)染效率低這個(gè)問(wèn)題,應(yīng)用受到了限制。自從腺病毒誕生后,因?yàn)槠涑瑥?qiáng)的感染能力,克服了原代細(xì)胞難感染的問(wèn)題,使得原代細(xì)胞的使用變得更加簡(jiǎn)單。由于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)后,很多時(shí)候需要做到動(dòng)物體內(nèi),由于原代細(xì)胞有體內(nèi)細(xì)胞的特點(diǎn),為了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果更加趨向一致性,因此用原代細(xì)胞來(lái)進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更值得考慮。

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