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技術(shù)文獻(xiàn)

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)各種添加物的具體作用說明
閱讀次數(shù):1410 發(fā)布時(shí)間:2024/2/21 10:52:04
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細(xì)胞培養(yǎng)所需添加物

通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)需要加入血清,以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。而除了血清之外,部分細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇等成分來維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細(xì)胞加入量會(huì)有差異,需根據(jù)細(xì)胞類型判斷。

胰島素作用廣泛,包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對(duì)細(xì)胞的作用,進(jìn)而引起組織乃至機(jī)體的整體反應(yīng)。一般可將胰島素在細(xì)胞水平的作用分為三大類:代謝作用、促生長(zhǎng)作用、以及代謝和促生長(zhǎng)混合作用。胰島素對(duì)細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過其與細(xì)胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導(dǎo),而胰島素對(duì)細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用則是通過其與細(xì)胞膜上胰島素樣生長(zhǎng)因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導(dǎo)的。在無血清細(xì)胞培養(yǎng)液中,常添加胰島素來維持細(xì)胞生長(zhǎng),調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時(shí)抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。

細(xì)胞生長(zhǎng)分裂的過程中會(huì)釋放氧自由基,而氧自由基累積到一定程度會(huì)破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜,從而殺死細(xì)胞。這使得細(xì)胞達(dá)很難達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需的融合度,從而影響實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)。β-巰基乙醇作為一種強(qiáng)還原,中和細(xì)胞培養(yǎng)基中積累的氧自由基從而改善細(xì)胞周圍環(huán)境。β-巰基乙醇在溶液中不穩(wěn)定,因此需要定期添加。本公司產(chǎn)品β-巰基乙醇用DPBS稀釋,濃度為50mM。例如:Thp-1細(xì)胞β-巰基乙醇終濃度為0.05mM,因此使用時(shí)需根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)要求添加。

丙酮酸鈉是常見的丙酮酸鹽,是一類內(nèi)源性小分子物質(zhì),丙酮酸鈉和丙酮酸均是天然存在于人體內(nèi),并參與全身各組織和器官的代謝。丙酮酸鈉在醫(yī)學(xué)上、診斷試劑以及醫(yī)療器械中被廣泛用作緩沖劑、賦形劑和抗氧化劑。在人體中行動(dòng)中大多數(shù)細(xì)胞只利用葡萄糖作為能量的物質(zhì)就夠了,而在細(xì)胞培養(yǎng)中丙酮酸鈉是必須的物質(zhì)。丙酮酸鈉在培養(yǎng)基中起到替代碳源的作用,參與細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)代謝。Hep G2,Caov-3及 NCI-H1395細(xì)胞培養(yǎng)基中就需要額外添加丙酮酸鈉,以維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。

L-谷氨酰胺是細(xì)胞生長(zhǎng)的必須氨基酸,可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中狀態(tài)不穩(wěn)定,它的降解速率隨保存時(shí)間,保存溫度及保存環(huán)境pH值等變化而變化。L-丙胺酰-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine)是細(xì)胞培養(yǎng)中廣泛使用的L-谷氨酰胺的替代品,其在水溶液中穩(wěn)定性高,即可保持長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的營(yíng)養(yǎng)供給,也降低了分解產(chǎn)物造成的細(xì)胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液可作為哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。與谷氨酰胺相比,L-丙胺酰-谷氨酰胺不會(huì)自行降解成氨而導(dǎo)致細(xì)胞毒性,作為添加物培養(yǎng)條件更加可控,可有效提高細(xì)胞活力。

保持細(xì)胞生長(zhǎng)良好狀態(tài)的法寶當(dāng)屬抗生素,適量濃度的的抗生素可有效防止微生物的污染。青霉素-鏈霉素混合溶液(Penicillin-Streptomycin Solution, 100×)是門用于細(xì)胞培養(yǎng)的雙抗,抗菌譜:革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混合溶液也是可用于細(xì)胞培,抗菌譜:細(xì)菌、真菌和酵母。細(xì)胞培養(yǎng)需要了解不同細(xì)胞生長(zhǎng)特性,還需要及時(shí)補(bǔ)充各類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以保持細(xì)胞良好的狀態(tài)。

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