技術文獻
微生物學實驗室所用的玻璃器皿，大多要進行消毒、滅菌和用來培養(yǎng)微生物，因此對其質量、洗滌和包裝方法均有一定的要求。一般，玻璃器皿的質量要求硬質玻璃，才能承受高溫和短暫燒灼而不致破損；器皿的游離堿含量要少，否則會影響培養(yǎng)基的酸堿度；對玻璃器皿的形狀和包裝方法的要求，以能防止污染雜菌為準；洗滌方法不恰當也會影響實驗結果。本節(jié)將對這幾方面作詳細介紹。
一、器皿的種類、要求與應用
1. 試管（test tube）
微生物學實驗室所用玻璃試管，其管壁必須比化學實驗室用的厚些，這樣在塞棉花塞時，管口才不會破損。試管的形狀要求沒有翻口，不然，微生物容易從棉塞與管口的縫隙間進入試管而造成污染。此外，現(xiàn)在有不用棉塞而用鋁制或塑料制的試管帽，若用翻口試管也不便于蓋試管帽。有的實驗要求盡量減低蒸發(fā)試管內的水分，則需使用螺口試管，蓋以螺口膠木或塑料帽。
試管的大小可根據(jù)用途的不同，準備下列三種型號。
（1）大試管（約18×180mm）可盛倒培養(yǎng)皿用的培養(yǎng)基；亦可作制備瓊脂斜面用（需要大量菌體時用）。
（2）中試管（約13-15×100-150mm）盛液體培養(yǎng)基或做瓊脂斜面用，亦可用于病毒等的稀釋和血清學試驗。
（3）小試管（10-12×100mm）一般用于糖發(fā)酵試驗或血清學試驗，和其他需要節(jié)省材料的試驗
2. 德漢氏試管（Durham tube）
觀察細菌在糖發(fā)酵培養(yǎng)基內產氣情況時，一般在小試管內再套一倒置的小套管（約6×36 mm），此小套管即為德漢氏試管，又稱發(fā)酵小套管。
3. 吸管（又稱移液管，pipette）
（1）玻璃吸管（glass pipette）微生物學實驗室一般要準備1、5、10 ml的刻度玻璃吸管。與化學實驗室所用的不同，其刻度指示的容量往往包括管尖的液體體積，亦即使用時要注意將所吸液體吹盡，故有時稱為“吹出”吸管。市售細菌學用吸管，有的在吸管上端刻有“吹”字。
除有刻度的吸管外，有時需用不計量的毛細吸管，又稱滴管，來吸取動物體液和離心上清液以及滴加少量抗原、抗體等。
（2）活塞吸管（piston pipette）主要用來吸取微量液體，故又稱微量吸液器或微量加樣器。其外形和結構如圖Ⅰ-4，除塑料外殼外，主要部件有按鈕、彈簧、活塞和可裝卸的吸嘴。按動按鈕，通過彈簧使活塞上下活動，從而吸進和放出液體。其特點是容量固定，使用時不用觀察刻度，操作方便、迅速。國內產品一般每個活塞吸管固定一種容量，分別有5、10、20、25、50、100、200、500、1000 μl等不同容量。而精制的活塞吸管每個在一定的范圍內可調節(jié)幾個容積，例如在5-25 μl的范圍內，可調節(jié)5、10、15、20、25 μl五個不同的量，使用時按需要調節(jié)，但當調節(jié)固定后，每吸一次，容量仍是固定的。用畢只需調換吸嘴或將吸嘴洗凈，消毒后再行使用。
活塞吸管是國外70年代后半期才開始生產與應用的，近年來國內亦日益廣泛應用于免疫學和使用同位素等的科學實驗中。
4. 培養(yǎng)皿（petridish）
常用的培養(yǎng)皿，皿底直徑90mm，高15mm。培養(yǎng)皿一般均為玻璃皿蓋，但有特殊需要時，可使用陶器皿蓋，因其能吸收水分，使培養(yǎng)基表面干燥，例如測定抗生素生物效價時，培養(yǎng)皿不能倒置培養(yǎng)，則用陶器皿蓋為好。
在培養(yǎng)皿內倒入適量固體培養(yǎng)基制成平板，用于分離、純化、鑒定菌種、微生物計數(shù)以及測定抗生素、噬菌體的效價等。
5. 三角燒瓶（Erlenmeyerflask）與燒杯（beaker）
三角燒瓶有100、250、500、1000 ml等不同的大小，常用來盛無菌水、培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵等。常用的燒杯有50、100、250、500、1000 ml等，用來配制培養(yǎng)基與藥品。
6. 注射器（injector）
一般有1、2、5、10、20、50 ml等不同容量的注射器。注射抗原于動物體內可根據(jù)需要使用1、2和5 ml的；抽取動物心臟血或綿羊靜脈血可采用10、20、50 ml的。
微量注射器有10、20、50、100 μl等不同的大小。一般在免疫學或紙層析等實驗中滴加微量樣品時應用。
7. 載玻片（slide）與蓋玻片（cover slip）
普通載玻片大小為75×25 mm，用于微生物涂片、染色，作形態(tài)觀察等。蓋玻片為18×18 mm。
凹玻片是在一塊厚玻片的當中有一圓形凹窩，作懸滴觀察活細菌以及微室培養(yǎng)用。
8．雙層瓶（double bottle）
由內外兩個玻璃瓶組成，內層小錐形瓶盛放香柏油，供油鏡頭觀察微生物時使用，外層瓶盛放二甲苯，用以擦凈油鏡頭。
9. 滴瓶（dropper bottle）
用來裝各種染料、生理鹽水等。
10. 接種工具
接種工具有接種環(huán)（inoculating loop）、接種針（inocula-ting needle）、接種鉤（inoculating hook）、接種鏟（inocula-ting shovel）、玻璃涂布器（glass spreader）等。制造環(huán)、針、鉤、鏟的金屬可用鉑或鎳，原則是軟硬適度，能經受火焰反復燒灼，又易冷卻。接種細菌和酵母菌用接種環(huán)和接種針，其鉑絲或鎳絲的直徑以0.5 mm為適當，環(huán)的內徑約2 mm，環(huán)面應平整。接種某些不易和培養(yǎng)基分離的放線菌和真菌，有時用接種鉤或接種鏟，其絲的直徑要求粗一些，約1 mm。用涂布法在瓊脂平板上分離單個菌落時需用玻璃涂布器，是將玻棒彎曲或將玻棒一端燒紅后壓扁而成。
二、玻璃器皿的清洗方法
清潔的玻璃器皿是實驗得到正確結果的先決條件，因此，玻璃器皿的清洗是實驗的一項重要準備工作。清洗方法根據(jù)實驗目的、器皿的種類、所盛放的物品、洗滌劑的類別和沾污程度等的不同而有所不同�，F(xiàn)分述如下：
1. 新玻璃器皿的洗滌方法
新購置的玻璃器皿含游離堿較多，應在酸溶液內先浸泡數(shù)小時。酸溶液一般用2％的鹽酸或洗滌液（見本小節(jié)“3”）。浸泡后用自來水沖洗干凈。
2. 使用過的玻璃器皿的洗滌方法
(1)試管、培養(yǎng)皿、三角燒瓶、燒杯等可用瓶刷或海綿沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗滌劑刷洗，然后用自來水充分沖洗干凈。熱的肥皂水去污能力更強，可有效地洗去器皿上的油污。洗衣粉和去污粉較難沖洗干凈而常在器壁上附有一層微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分沖洗，或可用稀鹽酸搖洗一次，再用水沖洗，然后倒置于鐵絲框內或有空心格子的木架上，在室內晾干。急用時可盛于框內或搪瓷盤上，放烘箱烘干。
玻璃器皿經洗滌后，若內壁的水是均勻分布成一薄層，表示油垢完全洗凈，若掛有水珠，則還需用洗滌液浸泡數(shù)小時，然后再用自來水充分沖洗。
裝有固體培養(yǎng)基的器皿應先將其刮去，然后洗滌。帶菌的器皿在洗滌先浸在2％煤酚皂溶液（來蘇爾）或0.25%新潔爾滅消毒液內24小時或煮沸半小時，再用上法洗滌。帶病原菌的培養(yǎng)物好先行高壓蒸汽滅菌，然后將培養(yǎng)物倒去，再進行洗滌。
盛放一般培養(yǎng)基用的器皿經上法洗滌后，即可使用，若需精確配制化學藥品，或做科研用的精確實驗，要求自來水沖洗干凈后，再用蒸餾水淋洗三次，晾干或烘干后備用。
(2)玻璃吸管吸過血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛細吸管），使用后應立即投入盛有自來水的量筒或標本瓶內，免得干燥后難以沖洗干凈。量筒或標本瓶底部應墊以脫脂棉花，否則吸管投入時容易破損。待實驗完畢，再集中沖洗。若吸管頂部塞有棉花，則沖洗先將吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，用水將棉花沖出，然后再裝入吸管自動洗滌器內沖洗，沒有吸管自動洗滌器的實驗室可用沖出棉花的方法多沖洗片刻。必要時再用蒸餾水淋洗。洗凈后，放搪瓷盤中晾干，若要加速干燥，可放烘箱內烘干。
吸過含有微生物培養(yǎng)物的吸管亦應立即投入盛有2％煤酚皂溶液或0．25％新潔爾滅消毒液的量筒或標本瓶內，24小時后方可取出沖洗。
吸管的內壁如果有油垢，同樣應先在洗滌液內浸泡數(shù)小時，然后再行沖洗。
(3)載玻片與蓋玻片用過的載玻片與蓋玻片如滴有香柏油，要先用皺紋紙擦去或浸在二甲苯內搖晃幾次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5-10分鐘，用軟布或脫脂棉花擦試，立即用自來水沖洗，然后在稀洗滌液中浸泡0．5-2小時，自來水沖去洗滌液，后用蒸餾水換洗數(shù)次，待干后浸于95％酒精中保存?zhèn)溆�。使用時在火焰上燒去酒精。用此法洗滌和保存的載玻片和蓋玻片清潔透亮，沒有水珠。
檢查過活菌的載玻片或蓋玻片應先在2％煤酚皂溶液或0．25％新潔爾滅溶液中浸泡24小時，然后按上法洗滌與保存。
3. 洗滌液的配制與使用
（1）洗滌液的配制洗滌液分濃溶液與稀溶液兩種，配方如下：
濃溶液 重鉻酸鈉或重鉻酸鉀（工業(yè)用） 50 g
自來水 150 ml
濃硫酸（工業(yè)用） 800 ml
稀溶液 重鉻酸鈉或重鉻酸鉀（工業(yè)用） 50 g
自來水 850 ml
濃硫酸（工業(yè)用） 100 ml
配法都是將重鉻酸鈉或重鉻酸鉀先溶解于自來水中，可慢慢加溫，使溶解，冷卻后徐徐加入濃硫酸，邊加邊攪動。
配好后的洗滌液應是棕紅色或桔紅色。貯存于有蓋容器內。
（2）原理 重鉻酸鈉或重鉻酸鉀與硫酸作用后形成鉻酸（chro-mic acid），酪酸的氧化能力強，因而此液具有強的去污作用。
（3）使用注意事項
（a）洗滌液中的硫酸具有強腐蝕作用，玻璃器皿浸泡時間太長，會使玻璃變質，因此切忌到時忘記將器皿取出沖洗。其次，洗滌液若沾污衣服和皮膚應立即用水洗，再用蘇打水或氨液洗。如果濺在桌椅上，應立即用水洗去或濕布抹去；
（b）玻璃器皿投入，應盡量干燥，避免洗滌液稀釋；
（c）此液的使用僅限于玻璃和瓷質器皿，不適用于金屬和塑料器皿；
（d）有大量有機質的器皿應先行擦洗，然后再用洗滌液，這是因為有機質過多，會加快洗滌液失效，此外，洗滌液雖為很強的去污劑，但也不是所有的污跡都可清除；
（e）盛洗滌液的容器應始終加蓋，以防氧化變質；
（f）洗滌液可反復使用，但當其變?yōu)槟G色時即已失效，不能再用。
三、空玻璃器皿的包裝
1. 培養(yǎng)皿的包裝
培養(yǎng)皿常用舊報紙密密包緊，一般以5-8套培養(yǎng)皿作一包，少于5套工作量太大，多于8套不易操作。包好后行于熱滅菌。如將培養(yǎng)皿放入銅筒內進行干熱滅菌，則不必用紙包，銅筒有一圓筒形的帶蓋外筒，里面放一裝培養(yǎng)皿的帶底框架，此框架可自圓筒內提出，以便裝取培養(yǎng)皿。
2. 吸管的包裝
準備好干燥的吸管，在距其粗頭頂端約0．5cm處，塞一小段約1．5cm長的棉花，以免使用時將雜菌吹入其中，或不慎將微生物吸出管外。棉花要塞得松緊恰當，過緊，吹吸液體太費力；過松，吹氣時棉花會下滑。然后分別將每支吸管尖端斜放在舊報紙條的近左端，與報紙約呈45度角，并將左端多余的一段紙覆折在吸管上，再將整根吸管卷入報紙，右端多余的報紙打一小結。如此包好的很多吸管可再用一張大報紙包好，進行干熱滅菌。
如果有裝吸管的銅筒，亦可將分別包好的吸管一起裝入銅筒，進行干熱滅菌；若預計一筒滅菌的吸管可一次用完，亦可不用報紙包而直接裝入銅筒滅菌，但要求將吸管的尖端插入筒底，粗端在筒口，使用時，銅筒臥放在桌上，用手持粗端拔出。
3. 試管和三角燒瓶等的包裝
試管管口和三角燒瓶瓶口塞以棉花塞（做棉塞的方法見實驗十九），然后在棉花塞與管口和瓶口的外面用兩層報紙（不可用油紙）與細線包扎好，進行干熱滅菌。試管塞好棉花塞后也可一起裝在鐵絲簍中，用大張報紙將一簍試管口做一次包扎，包紙的目的在于保存期避免灰塵侵入。
空的玻璃器皿一般用干熱滅菌，若需濕熱滅菌，則要多用幾層報紙包扎，外面好再加一層牛皮紙。如果試管是蓋的鋁帽，則不必包紙，可直接干熱滅菌。用塑料帽，則宜濕熱滅菌。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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