PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過正是由于它靈敏度高，微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性，因此，如何避免以及處理實驗室污染，對PCR人來說是一門必修課。
01、實驗室污染分類
樣本間交叉污染
主要是在采（取）樣的過程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過程中，由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。?
PCR試劑的污染
主要是在PCR試劑配制過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。
克隆質(zhì)粒的污染
在實驗室操作中經(jīng)常會用到陽性參考品，這些陽性參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成，克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用易造成污染。
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染
這是PCR反應(yīng)中主要常見的污染問題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個拷貝的限，所以微量的PCR產(chǎn)物污染，就可造成假陽性結(jié)果。還有一種容易忽視，可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染，在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠，據(jù)計算一個氣溶膠顆�？珊�4.8萬拷貝，因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。
02、消除污染的操作步驟
1.物料準(zhǔn)備
（1）購買噴壺（能夠噴出霧狀水汽的即可）；
（2）購買市面上有效氯消毒片，根據(jù)要求配制不同濃度的消毒液，或者購買成品次氯-酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水；
（3）購買核酸氣溶膠污染清除劑 （DNA AWAY?原液/ MediClean?稀釋100倍）；
（4）無紡布/無塵紙等。
2.處理方法
（1）清理廢液缸并且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染；
（2）用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進(jìn)行擦洗，關(guān)鍵部位為移液槍端易污染部位，清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍；
（3）將離心管架、擴(kuò)增管架、擴(kuò)增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時后，用清水沖洗干凈晾干后使用；
（4）對污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備如擴(kuò)增儀、全自動提取儀等，使用核酸氣溶膠污染清除劑進(jìn)行反復(fù)處理；對生物安全柜等含有空氣過濾系統(tǒng)的設(shè)備，需更換過濾網(wǎng)；
（5）用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室（地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方）進(jìn)行清潔，并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進(jìn)行噴霧消毒(重點部位為操作區(qū))，有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗臺表面的核酸污染；同時加大通風(fēng)量（內(nèi)循環(huán)無用，盡可能外循環(huán)）；
（6）待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后，常用設(shè)備和操作臺面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時；實驗室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。
步驟（1）-（6）必須堅持每天進(jìn)行，確保消除實驗室污染；
3.污染消除判斷標(biāo)準(zhǔn)
設(shè)計陰性對照組，根據(jù)陰性對照確認(rèn)污染情況�？墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區(qū)的陰性對照進(jìn)行實驗（在單獨(dú)的實驗室驗證），若連續(xù)三天陰性對照沒有起跳，則說明污染得到控制，可恢復(fù)正常實驗。
當(dāng)然，為蕞大程度的降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)，在實驗室期設(shè)計及日常實驗室管理和操作中，就需要進(jìn)行合理的規(guī)劃以及嚴(yán)格執(zhí)行實驗室SOP，把污染的可能性扼殺在搖籃中。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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