有人說，養(yǎng)細(xì)胞像養(yǎng)孩子，要小心翼翼地伺候。其實(shí)不然，養(yǎng)細(xì)胞像養(yǎng)祖-宗才對。孩子仍可罵可教育，但如果你對細(xì)胞粗暴點(diǎn)，他會分分鐘不開心，讓你難堪。也有人說，沒有遭受過污染的人定沒有養(yǎng)過多少細(xì)胞，但遇到污染不能妥善處理的也肯定不是“老司機(jī)”。
、常見污染的分類
常見的細(xì)胞污染分為以下幾類：1），細(xì)菌污染：2）真菌污染：3），霉菌污染；4），支原體污染。
芽孢桿菌、葡萄球菌是細(xì)菌污染的主要菌屬，污染的主要特征為培養(yǎng)基變黃、渾濁，低倍鏡下呈沙粒狀布滿細(xì)胞間隙或培養(yǎng)基，高倍鏡下可見桿狀或球狀的細(xì)菌在培養(yǎng)基中游動（與細(xì)胞碎片的布朗運(yùn)動明顯不同），有同學(xué)戲稱為“群魔亂舞”。需注意的是，在污染初期，細(xì)菌常成群存在，不定會有明顯的運(yùn)動，此時需引起警惕。
1. 細(xì)菌污染
常見的真菌污染是白色念珠菌污染，污染后培養(yǎng)基無明顯渾濁和變色，鏡下可見排列成串珠狀的球形真菌，污染嚴(yán)重時可見念珠菌連成片狀或團(tuán)狀。真菌的運(yùn)動能力較弱，鏡下般看不到運(yùn)動。
2. 念珠菌污染
霉菌污染時培養(yǎng)基般也不變渾濁，顏色變化也不明顯，但肉眼可見漂浮的白色菌落，顯微鏡下可看到樹枝狀的菌絲。
3. 霉菌污染
支原體在鏡下無法看到，因而支原體污染時只能看到細(xì)胞狀態(tài)明顯變差卻沒有其他微生物污染的跡象，此時可通過PCR檢測確定。
二、細(xì)胞污染的處理
應(yīng)對細(xì)胞污染的-好對策是預(yù)防！預(yù)防！再預(yù)防！養(yǎng)細(xì)胞要勤快，平時所用到的耗材、器皿等要及時高壓滅菌，滅菌后超過周未使用也應(yīng)重新滅菌。配制的完全培養(yǎng)基、胰酶、PBS等好在周內(nèi)用完。同時，也應(yīng)每天查看下細(xì)胞狀態(tài)。在細(xì)胞房內(nèi)應(yīng)盡量少地走動，盡量少地說話，若咳嗽或噴嚏時務(wù)必背向超凈臺。
細(xì)胞污染后-好的處理方式是丟棄。當(dāng)個別細(xì)胞十分珍貴無法丟棄時可盡力“急救”下。
那么如何急救呢？
1，判斷污染源。旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染的跡象或已污染，立即判斷可能的污染源：有無操作不當(dāng)？培養(yǎng)基、胰酶、PBS等顏色、澄清度是否正常？
2，及時處理。若確定現(xiàn)有的培養(yǎng)基、胰酶、PBS可用，則繼續(xù)使用；若無法確定則新配完全培養(yǎng)基、PBS、胰酶，原有的液體在確定是否污染后再做處理。
現(xiàn)以貼壁細(xì)胞為例向大家介紹下細(xì)菌污染時如何“急救”：
1），立即棄去培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基，以PBS潤洗2~3次，加入胰酶處理至細(xì)胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時棄去胰酶，加入PBS輕輕潤洗1遍；
2），加入20×雙抗，浸泡細(xì)胞3~5min，棄去雙抗；
3），加入新鮮的完全培養(yǎng)基（含10×雙抗）培養(yǎng)12 h；
4），12 h棄去培養(yǎng)基以PBS潤洗2~3遍后加入完全培養(yǎng)基（含10×雙抗）；
5），傳代時以較小轉(zhuǎn)速離心（如平時以1000 r/min離心，則可降為800~900 r/min離心），仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)；
6），若第二代后鏡下找不到細(xì)菌，則第三代起可正常培養(yǎng)。正常培養(yǎng)48 h后無反彈則可認(rèn)為污染已清除。
若為霉菌污染，在以PBS潤洗2~3遍后換液，無需加入高濃度雙抗。培養(yǎng)48 h后污染未再次出現(xiàn)即可。
若為真菌污染，在PBS潤洗、換液后可加入兩性霉素B（兩性霉素B有細(xì)胞毒性，不推薦使用），也可加入300μg/mL氟康唑培養(yǎng)，污染控制后改用150 μg/mL培養(yǎng)2~3代。
若懷疑支原體污染，則可進(jìn)行PCR檢測或直接使用支原體清除試劑（如：某恒生物）。也可購買環(huán)丙沙星注射液，于超凈臺內(nèi)打開直接添加到培養(yǎng)基中，以20μg/mL濃度 2代后改用10 μg/mL濃度持續(xù)培養(yǎng)約2周。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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