技術(shù)文獻(xiàn)
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動物細(xì)胞培養(yǎng)實驗的基本要求
①清洗玻璃制品時，浸酸之后一定要用自來水沖洗10～15次。因為殘存的洗液對細(xì)胞黏附有很大影響。清洗塑料制品時要用棉花或柔軟紗布擦洗。千萬不要用硬毛刷，否則損害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁。加樣器頭(Tip)和離心管(Tube)一定要用超聲清洗處理后逐個清洗．如沒有洗凈會影響下一次使用的效果。
②干熱滅菌時，應(yīng)在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免發(fā)生意外。當(dāng)溫度超過100℃時，不能玎開烤箱門。器皿烤完后，待溫度降至100℃之下才能開烤箱門。金屬器械、橡膠和塑料制品不能使用干熱滅菌方法。
③重高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干或烘干，以防包裝紙潮濕發(fā)霉：
④牛血清、大部分培養(yǎng)基、胰酶和一些生物制劑(如TdR，秋水仙素，谷氨酰胺，異硫氰酸胍，MOPS等)是有機(jī)溶液，均不能高壓。
⑤濾過除菌時，濾器在使用前先裝好濾膜(有時可在上面加一層定性濾紙)，包好，經(jīng)高壓滅菌后才能使用。濾過酶類制劑時應(yīng)待濾器溫度降至室溫后再進(jìn)行。過濾時壓力不宜過大，壓力數(shù)字以2為宜。壓力太大時微孔濾膜可能破裂，或使某些微生物變形而通過濾膜。裝濾膜時位置要準(zhǔn)確。另外濾器包裝時，螺釘不要擰得太緊，以防高壓蒸汽不能進(jìn)入，待高壓滅菌之后，再擰緊使用。
⑥使用化學(xué)消毒法時，配制。75％，酒精應(yīng)用衛(wèi)生級，不要用化學(xué)純、分析純和優(yōu)質(zhì)純酒精。來蘇兒水不能用于皮膚消毒，它對皮膚有刺激性�？諝庀緯r，所有的物品要事先準(zhǔn)備齊全并使消毒者有較方便的退出途徑。因為甲醛或乳酸加熱后放出的蒸氣對人的角膜和呼吸道上皮有嚴(yán)重的刺激和傷害作用。
1)實驗前準(zhǔn)備
實驗前必須分門別類地制訂操作卡片，如清洗卡、消毒卡、細(xì)胞常用液(細(xì)胞培養(yǎng)液、BSS液、消化液)配制卡、牛血清檢測分裝卡、細(xì)胞原代和傳代操作卡等：各卡片上注明實驗所需器材的名稱、規(guī)格、數(shù)量、操作要領(lǐng)和實驗注意事項等。實驗前應(yīng)按卡片收集、清點所需用品，一并放入超凈臺內(nèi)，這樣可避免操作時因物品不全而往返拿取所造成的污染：同時，根據(jù)每個實驗的要求，準(zhǔn)備好瓶管支架、器械消毒盒等。實驗器材準(zhǔn)備數(shù)要大于實驗使用數(shù)，瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù)。這樣才能有條不紊地做實驗，也減少了忙亂操作所引起的污染。
2)無菌室和操作室消毒
無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1～2次。實驗前，將實驗器材放入超凈臺內(nèi)，打開超凈臺紫外線燈，同時啟動超凈臺風(fēng)機(jī)，40min后消毒完畢，關(guān)閉紫外線燈。這樣，超凈臺內(nèi)空氣被凈化，超凈臺面構(gòu)成相對無菌的環(huán)境。
3)無菌操作要求
①手指不能觸及器材使用端。如觸及，器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口)。
②減少手與器材的接觸面，學(xué)會手指操作。
③一切操作，如打開或封閉瓶口，安裝吸管、注射器等，都要在火焰前方進(jìn)行。瓶口、吸管、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用。
④瓶口順風(fēng)斜放在支架上。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長時間敞開會增加落菌的機(jī)會。
⑤不同的細(xì)胞同時操作時，要專管專用，并要勤換吸管，防止擴(kuò)大污染和交叉污染。
⑥瓶口液滴不能倒回瓶內(nèi)。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再經(jīng)火焰消毒。
⑦操作者動作要準(zhǔn)確敏捷，盡量避免空氣流動。
4)實驗中操作要求
洗手、著裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中，并用75％的酒精擦拭。細(xì)胞培養(yǎng)用液從冰箱取出，試劑瓶口和外壁經(jīng)酒精紗布擦洗后入超凈臺。超凈臺面要用酒精紗布擦拭。超凈臺上的物品面布局合理，污物廢液缸、酒精棉球缸在右側(cè)位，酒精燈在中央位，試劑瓶在左側(cè)位。拆除大包裝，點燃酒精燈(95％酒精)�；鹧鏌o色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少，酒精燃燒完全(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精，這類酒精燃燒時產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶、皿上，帶入培養(yǎng)液中會傷害細(xì)胞)。浸泡。75％酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出，經(jīng)無菌干紗布擦拭后，迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長時間)，冷卻后使用，避免燙傷細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)液、牛血清、酶液的吸管，使用后不能再用火焰消毒，因為吸管中殘留的培養(yǎng)液被燒焦碳化，再使用時，會把有害碳化物帶人培養(yǎng)液中毒害細(xì)胞。操作中手指被污染時，可用酒精紗布或棉球擦拭。在實驗過程中，不要面向操作臺講話或咳嗽，避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內(nèi)，污染空氣。實驗者離開超凈臺時，立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口．避免無菌室內(nèi)細(xì)菌隨空氣流人凈化操作區(qū)。
5)實驗后要求
實驗完畢，關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī)和電源，未使用過的器材放入飯盒內(nèi)，用過的玻璃器材投入清水中浸泡，包裝紙疊卷，繩成束分類歸入，*后，超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭，紫外線消毒。
6)注意事項
無菌操作離不開火和酒精，操作中避免事故發(fā)生。要用打火機(jī)點火。火柴點火時，火星德滅后投入廢缸內(nèi)(缸內(nèi)有廢酒精棉球)。酒精濺出臺面或瓶外壁時，立即擦干；一旦發(fā)生著火事故，立即關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī)，用飯盒、濕布撲滅火焰。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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