細菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細菌生長繁殖的技術(shù)。細菌在自然界中分布廣，數(shù)量大，種類多，它可以造福人類，也可以成為致病的原因。大多數(shù)細菌可用人工方法培養(yǎng)，即將其接種于培養(yǎng)基上，使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。細菌培養(yǎng)是一個復(fù)雜的技術(shù)。
一、培養(yǎng)條件編輯培養(yǎng)時應(yīng)根據(jù)細菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進一步對所得單個菌落進行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、
蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2～3天后生長。個別細菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個月之久。
二、注意點
由于細菌無處不在，因此從制備培養(yǎng)基時開始，整個培養(yǎng)過程必須按無菌操作要求進行，否則外界細菌污染標本，會導(dǎo)致錯誤結(jié)果；而培養(yǎng)的致病菌一旦污染環(huán)境，就會引起交叉感染。
以疾病診斷為目的進行的培養(yǎng)，要選擇合適的標本（血、尿、便、膿液、分泌物等），并應(yīng)結(jié)合臨床情況解釋所得結(jié)果。
三、具體培養(yǎng)步驟
以光合細菌培養(yǎng)方法為例。光合細菌培養(yǎng)的方法，按次序分為容器、工具的消毒，培養(yǎng)基的制備，接種和培養(yǎng)管理四個步驟。
（一）容器、工具的消毒。
（二）培養(yǎng)基的制備
1．培養(yǎng)用水
如果培養(yǎng)的光合細菌是淡水種，菌種培養(yǎng)可用蒸餾水，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來水（或井水）配制。如果培養(yǎng)的光合細菌是海水種，則用天然海水配制培養(yǎng)基，注意在海水中加入磷元素時，不能用磷酸氫二鉀，應(yīng)用磷酸二氫鉀，不然會產(chǎn)生大量沉淀。
2．滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白/粉（或漂白液）消毒后使用。
3．培養(yǎng)基配制根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時按比例加入一定的量即可。
（三）接種培養(yǎng)基配好后，應(yīng)立即進行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高，一般為20%～50%，即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1∶4～1∶1，不應(yīng)低于20%，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應(yīng)高些，否則光合細菌在培養(yǎng)液中很難占絕對優(yōu)勢，影響培養(yǎng)的終產(chǎn)量和質(zhì)量。
（四）培養(yǎng)管理光合細菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個方面。
4、日常管理和測試
（1）攪拌和充氣：光合細菌培養(yǎng)過程中必須充氣或攪拌，作用是幫助沉淀的光合細菌上浮獲得光照，保持菌細胞的良好生長。小型厭氣培養(yǎng)常用人工搖動培養(yǎng)容器的方法使菌細胞上浮，每天至少搖動三次，定時進行。大型厭氣培養(yǎng)則用機械攪拌器或使用小水泵使水緩慢循環(huán)運轉(zhuǎn)，保持菌體懸浮。微氣培養(yǎng)是通過充氣幫助菌體上浮，因為培養(yǎng)液中溶解氧含量增加，光合細菌繁殖受到抑制，產(chǎn)量下降，所以必須嚴格控制充氣量。一般采用定時斷續(xù)充氣，充氣量控制在1～1.5升/（升·h）之間，溶解氧量保持在1×10-6以下。
（2）調(diào)節(jié)光照度：培養(yǎng)光合細菌需要連續(xù)進行照明。在日常管理工作中，應(yīng)根據(jù)需要經(jīng)常調(diào)整光照度。白天可利用太陽光培養(yǎng)，晚上則需要人工光源照明，或完/全利用人工光源培養(yǎng)。人工光源一般使用碘鎢燈或白熾燈泡。不同的培養(yǎng)方式所要求的光照強度有所不同。一般培養(yǎng)光照強度應(yīng)控制在2000～5000lx之間。如果光合細菌生長繁殖快，細胞密度高，則光照強度應(yīng)提高到5000～10000lx。光照強度可通過調(diào)整培養(yǎng)容器與光源的距離或使用可控電源箱調(diào)節(jié)。
（3）調(diào)節(jié)溫度：光合細菌對溫度的適應(yīng)范圍很廣，一船在23～39℃的范圍內(nèi)均能正常生長繁殖，可不必調(diào)整溫度。在常溫下培養(yǎng)也可通過調(diào)整，將溫度控制在光合細菌生長繁殖適宜的范圍內(nèi)，使光合細菌更好地生長。
（4）酸堿度的測定和調(diào)整：在培養(yǎng)光合細菌的過程中，必須注意酸堿度的變化。由于光合細菌的大量繁殖，菌液的pH值上升，這意味著光合細菌正處于指數(shù)生長/期。但當pH值超過適范圍甚至生長的適應(yīng)范圍時，光合細菌的生長達到頂點，隨后生長下降。如果能及時調(diào)整菌液的酸堿度，使pH值保持在適范圍，則光合細菌能繼續(xù)生長繁殖。為了延長光合細菌的指數(shù)生長/期，提高培養(yǎng)基的利用率和單位水體的產(chǎn)量，測定和調(diào)整PH值是非常重要的。一船采用加酸的辦法來降低菌液的酸堿度，醋酸、乳酸和鹽酸部可使用，常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必須每天或隔天測定菌液的pH值，當pH值上升超出適范圍，即加酸調(diào)整。如果在培養(yǎng)過程中不測定、調(diào)整酸堿度，當光合細菌的生長達到一定密度后pH值也上升到9以上，細菌生長受阻，此時應(yīng)采收或再擴大培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中不調(diào)整PH值，獲得的終產(chǎn)量低。
5、培養(yǎng)成敗的標準編輯生長情況的觀察和檢查光合細菌生長情況的好壞是培養(yǎng)成敗的標準。在培養(yǎng)過程中，可以通過觀察菌液的顏色及其變化來了解光合細菌生長繁殖的大體情況，菌液的顏色是否正常，接種后顏色是否由淺變深，均反映光合細菌是否正常生長繁殖以及繁殖速度的快慢。必要時可通過顯微鏡檢查，了解情況。
6、問題的分析和處理編輯通過日常管理、檢測、檢查，了解光合細菌的生長情況，就可以結(jié)合當時環(huán)境條件的變化進行分析，找出影響光合細菌生長繁殖的原因，采取相應(yīng)的措施。影響光合細菌生長的原因很多，內(nèi)因是菌種是否優(yōu)良，外因是光照、溫度、營養(yǎng)、敵害和厭氣程度等。溫度、光照和pH值都能影響著光合細菌的生長，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強弱是對立統(tǒng)一的，所以光合細菌生長的適條件應(yīng)是互應(yīng)的，即溫度高，光照應(yīng)弱；溫度低，光照應(yīng)強。如果是溫度高，光照強，pH值就會迅速升高，培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀，抑制光臺細菌的生長；如果溫度低，光照弱，光合細菌得不到/佳能源，生長速度也慢。
經(jīng)試驗得出光合細菌生長的適條件是：
①溫度15～20℃時，光照30000～50000lx，培養(yǎng)基pH值為7.0；
②溫度25～30℃時，光照為3000～5000lx，培養(yǎng)基的pH值為7.0。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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